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2025年10月18日 10:35 来源：
生物素-16-UTP（Biotin-16-UTP）是一种将生物素与尿苷三磷酸（UTP）通过长链连接臂结合的标记核苷酸，主要用于RNA的标记、检测及功能研究。以下从其定义、用途、分子结构特性及构建方式四方面进行详细阐述：
一、定义与用途
生物素-16-UTP是一种修饰的尿苷三磷酸，其中生物素通过一个16碳链连接到UTP上。它在分子生物学和生物技术中有多种应用，尤其在RNA的标记和检测方面表现出色。通过在体外转录反应中掺入生物素-16-UTP，可以生成带有生物素标记的RNA分子，便于后续的检测和纯化。这种标记方法广泛应用于Northern Blot、RNA杂交实验、体外转录研究以及RNA-蛋白质相互作用研究等领域。
二、分子结构特性
生物素（Biotin）：
生物素是一种小分子维生素，能够与亲和素或链霉亲和素特异性结合。这种特异性结合能力使得生物素标记的RNA分子可以通过亲和素-生物素系统进行高效的捕获和检测。
16-碳链连接臂：
16-碳链是一个柔性的长链，用于连接生物素和UTP。这种长链连接臂有助于减少生物素对RNA二级结构和功能的干扰，同时提高生物素与UTP之间的结合效率。
尿苷三磷酸（UTP）：
UTP是RNA合成过程中重要的前体物质。在体外转录过程中，UTP被RNA聚合酶用作底物来合成RNA链。生物素-16-UTP中的UTP部分保持了其作为RNA合成前体的功能，同时通过长链连接臂引入了生物素标记。
三、构建方式
生物素-16-UTP的构建通常涉及两个主要步骤：
生物素与16-碳链连接臂的连接：
将生物素与16-碳链连接臂在适当的溶剂中混合，并加入EDC（1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺）和NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）等试剂，以促进酰胺键的形成。反应在室温下进行数小时，生成生物素化的16-碳链。
生物素化的16-碳链与UTP的连接：
将生物素化的16-碳链与UTP在有机溶剂中混合，并再次加入EDC和NHS等试剂，以促进酰胺键的形成。反应同样在室温下进行数小时。反应完成后，通过纯化方法（如高效液相色谱HPLC或柱层析）去除未反应的物质和副产物，得到纯化的生物素-16-UTP。
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